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人抗心肌抗體酶聯免疫試劑盒使用方法

點擊次數:2932 發布時間:2025/9/29
提 供 商: 上海研生生化試劑有限公司 資料大小:
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人抗心肌抗體酶聯免疫試劑盒說明書

規格:96T/48T

特點:靈敏性高,性,吸附均勻,吸附性好,回收利用率高,是一款可以讓您放心選購的抗心肌抗體IgM(HRAb IgM)酶免ELISA試劑盒產品。

使用范圍:此產品供科研實驗使用,不得用于臨床。

用途:用于測定人血清、血漿、組織及相關液體樣本中的含量或活性。

具體保質期請見試劑盒外包裝標簽。請在保質期內使用試劑盒。聯系時請提供產品貨號、生產日期(見盒簽),以便我們更高效為您服務。

【試劑盒特點】

1.專一性強。抗原與抗體的反應是專一反應,而酶技術以反應為基礎,所檢測的對象是抗原(或抗體),使用的抗體除標記了酶以外,與普通抗體的反應特性并無多大差別。

2.靈敏度高。由于抗體聯結上了酶,因此,借助于酶與底物的顯色反應,顯示抗原與抗體的結合,大大提高了檢測的靈敏性,使檢測水平接近放射測定法。

3.樣品易保存。經過酶反應顯示的有色產物大多比較穩定,因此有利于樣品的保存。

4.結果易觀察。對檢測結果即可用肉眼觀察,又可用顯微鏡觀察,也可以用分光光度計進行比色測定,還可用顯微鏡觀察。這是因為某些酶反應產物能使電子密度發生改變,從而引起被檢測物的顯示。

5.可以定量測定。溶液中的抗原物質,應用酶免吸附技術進行比色測定,依據光密度值的變化,可以定量。預計用細胞分光光度計可對組織內的抗原進行酶技術的定量測定。

6.可以大規模測定樣品。如有成千上萬份樣品需要進行檢測,酶技術都能在較短時間內完成。

7.儀器和試劑簡單。對沒技術來說,不需要熒光顯微鏡,也不需要測定放射性的特殊儀器,所用儀器及試劑均屬一般性儀器與試劑,普通實驗室及生產應用單位均易購置.

穩定性:2℃-8℃保存,有效期 6 個月。

樣品收集、處理及保存方法

1)血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3)細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液

5)保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

1)標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。

2)洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

操作注意事項

1)試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

2)實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

3)不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6)洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7)底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

8)加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9)按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

操作步驟

1)使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。

2)根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。

3)加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。

4)甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

6)甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

7)每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。

8)取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。

9)在450nm波長處測定各孔的OD值。

局限

6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到精確的結果。

試劑盒性能

1. 靈敏度:最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

2. 特異性:不與其它細胞因子反應。

3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

結果判斷與分析

1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的待測物質標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的待測物質含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。


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